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Stbl2

2015-8-26


Stbl2 Chemically Competent Cell

產品說明書



產品規格(CAT#: DL1045)

Stbl2:                                                                100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期):                                 -80℃(6個月) 


基因型

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 


產品說明

Stbl2菌株來源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩定插入片段 (正向重復序列,逆轉錄病毒序列等); mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時Stbl2也可用于慢病毒載體的構建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。Stbl2感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19檢測轉化效率可達109 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Stbl2感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)。

4. 37℃,225 rpm復蘇60分鐘或30℃,225 rpm復蘇90分鐘。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃225 rpm復蘇60分鐘

5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃培養過夜)


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培養基均可使用,S.O.C.可提高轉化效率20%;實驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞,37℃條件下,菌生長速度加快,有利于提高質粒產量,30℃培養可降低錯誤重組概率。




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