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BJ5183-AD-1

2016-3-31

BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell

產品說明書



產品規格(CAT#: DL1076)

BJ5183-AD-1:                                              100μl/支

pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl):         10μl

保存條件(保質期):                              -80℃(6個月) 


基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)] 


產品說明

BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株,是目前腺病毒系統最常用的感受態細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變,賦予BJ5183細胞較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。endA1(缺失核酸內切酶)的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株細胞中已經提前轉入了腺病毒質粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)],賦予該菌株氨芐抗性,在病毒質粒構建時,只需轉入線性化的目的質粒即可,簡化了實驗步驟,提高了病毒質粒重組概率。StrR 賦予BJ5183-AD-1菌株鏈霉素抗性。BJ5183-AD-1感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒(size:1163bp)檢測轉化效率>1×105 cfu/μg DNA。


操作方法

1. BJ5183-AD-1感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒(含有目標基因并線性化),并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入目的DNA時應輕柔操作。

3. BJ5183-AD-1菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后,可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴繁,純化質粒。

4. BJ5183-AD-1感受態細胞對溫度敏感,應儲存在-80℃超低溫冰箱,避免溫度波動,溫度波動會降低感受態轉化效率。




說明書下載

BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell 產品說明書


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