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YM4271

2019-5-28

YM4271 Chemically Competent Cell

產品說明書 


 

產品規格 (CAT#: YC1090)

YM4271 :                100μl/支      保存: -80℃(3個月)

pGADT7  :                     10μl       保存:-80℃(12個月)

Carrier DNA :             100μl       保存:-20℃(12個月)

PEG/LiAC:                   5ml        保存:    4℃(12個月) 


基因型

MATa, ura3–52, his3-Δ200, ade2–101, ade5, lys2–801, leu2–3,112, trp1–901, tyr1–501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG


產品說明

YM4271菌株,MATa型,可直接轉化質粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為:trp1leu2ura,報告基因為: HIS3。可用于酵母雙雜,酵母單雜或異源蛋白表達等試驗。YM4271感受態細胞經特殊工藝制作,-80℃可保存三個月,pGADT7質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。


操作方法

1. 取100 μl冰上融化的YM4271感受態細胞,依次加入預冷的目的質粒2-5 μg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重復一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻,30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。

2. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清,ddH2O 400 μl 重懸,離心 30s棄上清。

4. ddH2O 50 μl重懸,涂板,29℃培養48-96 h。



注意事項

1. 感受態細胞最好在冰上融化。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4. YM4271酵母菌株對高溫敏感,最適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數下降。

5. 菌落變粉不是污染,是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后,平板上的Adenine被酵母消耗完畢,酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破壞,Adenine合成途徑受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中間產物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。

6. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢,培養基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48 h培養可見直徑1 mm克隆;涂SD單缺平板29℃,48-60 h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80 h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養可見直徑1 mm克隆。




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YM4271 Chemically Competent Cell 產品說明書


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